Аргус – Конец Ордена Ментальных Имперских Магов 3 (страница 24)

Сделали ей и новую биографии. Вместо ребенка из нищей актерской семьи нас свет появилась английская леди, графиня Мэри Норфолкская, последняя представительница обедневшего, но очень древнего рода, предки которого прибыли на британские острова вместе с Вильгельмом Завоевателем.

Вместе с новой биографией у нее появился и новый возраст. Ей стало семнадцать лет. И ее отправили учиться в Российскую Академию Управления как секретного агента.

Увидев ее лицо, посол оказался весьма впечатлен. Несмотря на всю его официальную сухость ничего человеческого и мужского ему не было чуждо.

- Пройдемте в мой личный кабинет, и я сам проверю, так ли Вы хороши в этом ремесле, как написано в Вашем личном деле, - усмехнувшись произнес встав с кресла посол. Он открыл замаскированную дверь в книжном шкафу за своей спиной, приглашая пройти в нее агентессу.

- Как милорду будет угодно! - беспристрастно ответила та, и снимая на ходу свой плащ проследовала в секретную комнату.

Оставшиеся до пятницы дни пролетели в суматохе. Катя с Лосем активно обходили фруктовые лавки в поиске заплесневевших дынь. Сначала дело шло очень туго. Никто из хозяев даже слышать об этом не хотел. Потом Лось придумал платить приказчикам в лавках за каждую сгнившую дыню по полтиннику. И дело пошло так, что на время пришлось прекратить сбор новых образцов. После разговора Петра и Императора, Лось выбил у Лобова разрешение помогать Кате во всей ее работе официально, и теперь не отходил от нее ни на шаг. Пока она была на занятиях, он обходил фруктовые лавки, и помойки. Вскоре он стал своим среди всех бомжей ближайших районов города. Одновременно он занимался их вербовкой в систему личных осведомителей.

Принесенную плесень сначала внимательно изучала Катя, сразу отбраковывал те, которые по внешнему виду никак не соответствовали искомому грибку. Отобранные образцы она засевала штрихом на картофельный агар-агар в чашки Петри.

Грибок пеницилл (Penicillium) на картофельном агаре (PDA) обычно растет в течение пяти - семи дней при оптимальной температуре. Первые признаки роста мицелия становятся заметны уже через восемнадцать-сорок восемь часов после инокуляции. На третий - пятый день формируется хорошо развитая грибница. В этот период колонии часто имеют белый цвет, который позже меняется из-за спороношения. Полное созревание колонии достигается к пятому - седьмому дню и они приобретают типичный вид (часто бархатистые, сине-зеленого или серо-зеленого цвета из-за конидий). Для детального изучения морфологии или накопления продуктов метаболизма посевы могут выдерживать до десяти - четырнадцати дней.

Катя предупредила, что образцов становится так много, что вскоре все е время будет уходить на пересаживание уже полученных образцов, поэтому Петр должен будет дать ей критерии для для отбора и сохранения нужных штаммов.

Сначала Петр хотел предложить ей использовать метод, который применял сам Флеминг в своих исследованиях, так называемый "траншейный метод", о котором ему рассказал Голос. Под «траншейным методом» (или методом «канавок») Флеминга понимается способ лабораторного тестирования антибактериальной активности пенициллина, который он использовал после открытия вещества в тысяча девятьсот двадцать восьмом году. Суть метода заключалась в следующем:

Создание «траншеи»: В слое питательного агара на чашке Петри вырезалась узкая полоска (канавка).

Заполнение: Эту канавку заполняли смесью агара и «плесневого сока» (бульона, в котором рос гриб Penicillium).

Посев бактерий: Перпендикулярно этой траншее на поверхность агара полосками высевались различные виды бактерий (стафилококки, стрептококки, дифтерийная палочка и др.).

Результат: По мере роста бактерий было видно, что чувствительные к пенициллину микробы переставали расти на определенном расстоянии от траншеи, образуя прозрачную зону подавления. Это позволяло Флемингу наглядно сравнивать чувствительность разных микроорганизмов к антибиотику на одной чашке.

Этот метод подтвердил, что пенициллин эффективен против многих грамположительных патогенов (возбудителей пневмонии, менингита, дифтерии), но не действует на грамотрицательные бактерии, такие как возбудитель инфлюэнцы или брюшного тифа.

- Слушай, - сказал Сергей, - по моему, это очень муторный метод. У нас десятки образцов. На каждый нужна одна чашка Петри. Это сколько работы и сред нужно? Потом, на разных чашках тестовая культура стафилококка может быть разная, а нам нужно сравнивать пенициллиновую активность штаммов грибков между собой! Нужно что-то другое!

- Согласен, заездим мы Катю, а потом нам Лось шею намылит! Он с нее пылинки сдувает! Прямо как мальчишка! Смотреть смешно! Взрослый мужик а за ней как пацан ухаживает! - ехидно заметил внутренний собеседник.

- А ты не завидуй! - рассмеялся попаданец, - а что он должен делать? Стукнуть ее кулаком по голове, как мы Дашу, и в спальню поволочь?

- Думаю, она скоро его сама поволочет! Пропал наш Лось! - усмехнулся Голос, - ладно давай к делу! Есть у меня такой вариант! Он проще и лучше! Но придется Кате все рассказать! Не боишься?

- А чего бояться? Если у них с Лосем все сладится, то это будут члены нашей команды! Кроме этого, нас патронирует сам Император! А с ним не забалуешь, если кто захочет украсть наше изобретение! - пожал плечами Сергей.

Приняв решение он направился во флигель где работали Катя и Лось. Тот научился делать засевы чашек Петри и активно помогал своей подружке. Они весело беседовали и смеялись.

- "Ну прямо два голубка"! - порадовался за них попаданец. Бактериологи заметили его и помахали ему рукой.

- Катя, - начал Петр, - мы переходим ко второму этапу нашей работы. Отбору нужных нам штаммов грибков. Мы будем отбирать их по степени убивать тестовые патогенные бактерии. Вот что нужно сделать. Сначала ты вырастишь чистую культуру каждого полученного штамма в пробирке с жидкой средой. За один раз будем испытывать десять образцов. Когда они вырастут, ты уровняешь концентрацию клеток в них по стандарту мутности. Чтобы потом мы могли сравнивать и другие партии.

- Понятно, - кивнул Катя записывая все, что ей говорит юноша.

- Затем ты открутишь их на центрифуге что бы осадить клетки грибка на дне пробирок. Потом возьмешь фильтровальную бумагу и простерилизуешь ее в автоклаве. Предварительно вырежешь из нее диско размером с чашку Петри, чтобы на легла на ее дно. Чистые Чашки Петри простерилизуешь в сухожаровом шкафу. Там же простерилизуешь стеклянные пипетки.

- Дальше, - продолжала записывать девушка.

- В каждую стерильную чашку положишь по диску стерильной фильтровальной бумаги, а потом в отельную чашку нальешь одинаковое количество надосадочной жидкости из пробирок с культурой грибка. Один большой диск - один штамм. Потом вытащишь диск и перенесешь в чистые стерильные чашки Петри и высушишь их при комнатной температуре. Потом возьмешь стерильное сверло для резиновых пробок диаметром шесть миллиметров и вырежешь из большого диска множество маленьких дисков. Перенесешь их в пробирки с резиновыми пробками, подпишешь, чтобы мы знали, от какого штамма получены эти диски. Хранить их нужно в холодильнике при двух - восьми градусах Цельсия или вообще заморозить.

- Нужно купить холодильник с морозильником, - сказала Катя.

- Далее! - продолжил попаданец, - Приготовишь бактериальную суспензию золотистого стафилококка, эквивалентную стандарту мутности ноль пять по МакФарланду, из чистой ночной культуры. Равномерно засей поверхность агара стерильным ватным тампоном.

С помощью стерильных пинцетов поместишь по одному диску из от каждого штпмма на поверхность засеянного агара, слегка прижимая для полного контакта. Расстояние между дисками должно быть не менее двадцати четырёх миллиметров, а также от края чашки. Инкубируешь перевернутые чашки Петри при температуре тридцать семь градусов Цельсия в течение шестнадцати - восемнадцати часов часов. Измеришь диаметры зон подавления роста вокруг каждого диска и запишешь их размеры.

- Как я узнаю эти зоны? - подняла голову Катя.

- Содержимое диска будет диффундировать в агар и убивать микробы. Поэтому вокруг диска будет зона просветления! Тогда как вся остальная поверхность будет мутной от выросших колоний стафилококке. Чем больше зона просветления, тем сильнее штамм грибка вырабатывает антибиотик!

- Что вырабатывает? - удивилась Катя.

— Болтун — находка для шпиона! — язвительно произнес Голос, — ну и что ты ей скажешь?

— Это не я, это ты говори, — усмехнулся Сергей, — нам же все равно нужно будет его как-то назвать!

— Ясно что я, — с гордостью заявил Голос, — толку с тебя никакого! Ты знаешь что слово антибиотик ввел не вовсе не Флеминг? Я вообще подозреваю, что это был еще тот недотепа! Вот свезло ему один раз, и на всю жизнь хватило! Представляешь он женился второй раз в семьдесят два года на женщине на тридцать лет его моложе, а через два года после этого двинул кони! Заездила видать его молодая женушка! — ехидно захихикал сплетник.

— Это его личное дело! А кто ввел слово антибиотик? — удивился попаданец.

— Термин «антибиотик» (от греческих anti — «против» и bios — «жизнь») ввел американский микробиолог и биохимик Зельман Ваксман в тысяча девятьсот сорок втором году, когда он открыл стрептомицин, чтобы описать вещества из микроорганизмов, убивающие другие микробы, хотя Александр Флеминг задолго до этого открыл пенициллин, но не ввел этот термин. Не было у Флеминга широты научного мышления! — назидательно произнес Голос.